Waters600E-2487液相色譜系統(tǒng)操作規(guī)程

1. 目的
規(guī)范Waters高效液相色譜系統(tǒng)的使用和維護。
2. 范圍
本規(guī)程適用于Waters高效液相色譜系統(tǒng)的使用和維護。
3. 職責
質(zhì)檢室儀器分析員負責Waters高效液相色譜系統(tǒng)的日常使用和維護。
4. 系統(tǒng)組成
本系統(tǒng)由Waters 600E多溶劑輸送系統(tǒng)（有梯度控制器的高壓輸液泵）、Waters在線脫氣機、Rheodyne 7725i手動進樣閥、Waters 2487雙通道紫外檢測器、Millennium32色譜工作站/電腦等組成，另外還包括打印機、UPS和通風(fēng)柜等輔助設(shè)備。
5. 程序
5.1. 準備
5.1.1. 使用前應(yīng)根據(jù)待檢樣品的檢驗方法準備所需的流動相（應(yīng)足夠；流動相必須用0.45μm濾膜過濾）、樣品和標準溶液（也可在平衡系統(tǒng)時配制），更換合適的色譜柱（柱進出口位置應(yīng)與流動相流向一致）和定量環(huán)。
5.1.2. 通電前應(yīng)檢查儀器設(shè)備之間的電源線、數(shù)據(jù)線和輸液管道是否連接正常。
5.2. 開機和泵操作
5.2.1. 開機
5.2.1.1. 接通UPS的電源，依次打開斷電保護器、脫氣機、600E泵、2487檢測器，待檢測器自檢結(jié)束顯示測量狀態(tài)時，打開打印機、電腦顯示器、主機。
5.2.1.2. 打開Millennium32軟件，按「Login...」，輸入用戶名和密碼，按「OK」注冊進入系統(tǒng)主界面。在Project檔內(nèi)選擇所需的項目，右擊『Run Samples』圖標，選擇色譜系統(tǒng)“600_2487”后打開QuickSet窗口。
5.2.2. 更換溶劑
5.2.2.1. 打開600E泵后，轉(zhuǎn)動進口集合管閥手柄（以下簡稱手柄）至RUN位置；
5.2.2.2. 將一塑料燒杯放在參照閥出口管下以收集分流的溶劑，向右打開參照閥（斷開柱和進樣器）；
5.2.2.3. 按［Direct］鍵使其顯示直接控制屏幕，設(shè)流速為1ml/min（梯度配比閥在0ml/min時不工作）；
5.2.2.4. 選擇欲使用的某一溶劑通道，設(shè)其比例為100%，其它為0%；
5.2.2.5. 將輸液管從原有溶劑瓶中取出，放入一干凈的空瓶中；
5.2.2.6. 逆時鐘轉(zhuǎn)動手柄至DRAW位置，用啟動注射器從進口集合管閥的接口抽出約2ml溶劑；
5.2.2.7. 再將輸液管放入新溶劑瓶內(nèi)，繼續(xù)抽吸直到新溶劑出來并無氣泡為止；
5.2.2.8. 轉(zhuǎn)動手柄至RUN位置，將啟動注射器取下并排掉筒內(nèi)的溶劑。
5.2.2.9. 重復(fù)5.2.2.4.~5.2.2.8.直至所有即將使用的溶劑更換完畢。
5.2.3. 排氣泡
5.2.3.1. 打開參照閥，換流動相為100%超純水，設(shè)流速為10ml/min（注意：確認參照閥是打開的，否則可能損壞安裝好的柱）；
5.2.3.2. 轉(zhuǎn)動進口集合管閥手柄至DRAW位置，用啟動注射器抽出約10ml水；
5.2.3.3. 順時鐘轉(zhuǎn)動手柄至INJ位置，緩慢用力使水通過泵頭從參照閥出口管排出（注意不要將氣泡注入泵中）；
5.2.3.4. 按［Stop flow］屏幕鍵停泵，關(guān)上參照閥。
5.2.3.5. 如按以上方法不能排盡氣泡，從柱入口處拆下泵出口管，用塑料管連接至塑料燒杯中，設(shè)流速為10ml/min，沖洗2~5min（或更長時間）后停泵，重新接上柱。
5.3. 平衡系統(tǒng)（分兩種情況進行）
5.3.1. 等度模式
5.3.1.1. 每次以0.1ml/min的增量加大流速至1ml/min，以超純水沖洗系統(tǒng)10min。
5.3.1.2. 檢查管路連接、柱接口及泵頭處是否漏液，如漏液應(yīng)予以排除。
5.3.1.3. 觀察泵控制屏幕上的壓力值，壓力波動應(yīng)在平均值的5~10%以內(nèi)。如超出此范圍，可初步判斷為柱前管路仍有氣泡，重復(fù)5.2.3.下的步驟。
5.3.1.4. 壓力波動平穩(wěn)后，換檢驗方法規(guī)定的流動相比例沖洗系統(tǒng)。在檢查基線穩(wěn)定性前，讓最少5~6倍柱體積的流動相通過系統(tǒng)。
5.3.1.5. 在QuickSet窗口下的Instrument Method檔內(nèi)選擇所需的儀器方法，按「Monitor」（此后泵由軟件控制），觀察基線和壓力變化。如果沖洗至基線漂移<10-3Au/min，噪聲為10-4Au數(shù)量級，且壓力平穩(wěn)時，可認為系統(tǒng)已達到平衡狀態(tài)，可以進樣。
5.3.1.6. 按「Abort」圖標（左上第五個），停止監(jiān)視基線。
5.3.2. 梯度模式
5.3.2.1. 按檢驗方法規(guī)定的條件沖洗平衡系統(tǒng)，并注意壓力波動變化和排氣泡。
5.3.2.2. 在進樣前運行1~2次空白梯度。
5.4. 進樣
5.4.1. 在QuickSet窗口內(nèi)左下部選〈Single〉標簽，在Sample Name檔內(nèi)填寫試樣名稱；在Function檔內(nèi)選擇試樣類型（標準選“Inject Standards”；樣品選“Inject Samples”）；在Method Set檔內(nèi)選擇所需的方法組；在Injection Volume檔內(nèi)輸入進樣體積；在Run Time檔內(nèi)輸入記錄時間。
5.4.2. 用針頭濾器過濾試樣溶液（注射液可不必過濾），用試樣溶液清洗注射器，并排除氣泡后抽取適量。
5.4.2.1. 如按部分裝液法，用微量注射器定容進樣時，進樣量應(yīng)不大于定量環(huán)體積的50%，并要求每次進樣體積準確、相同；
5.4.2.2. 如按完全裝液法，用定量環(huán)定容進樣時，進樣量應(yīng)不小于定量環(huán)體積的3倍（5~10倍準確性更佳）。
5.4.3. 按〈Single〉標簽內(nèi)右邊的進樣(Inject)按鈕，等待窗口底部狀態(tài)檔內(nèi)顯示“Waiting”后，方可進樣。
5.4.4. 將進樣閥手柄轉(zhuǎn)動至Load位置，將注射器針完全插入進樣閥入口中，平穩(wěn)地注入試樣溶液，除另有規(guī)定外，讓注射器留在進樣閥上，將進樣閥手柄快速轉(zhuǎn)動至Inject位置，系統(tǒng)將自動運行，采集數(shù)據(jù)并記錄圖譜。
5.4.5. 讓進樣閥手柄保持在Inject位置，到下次進樣前1~2min切換回Load位置，將注射器從進樣閥中拔出。
5.4.6. 先用水再用試樣溶液清洗注射器后，按以上程序繼續(xù)進樣，直至完成。
5.5. 數(shù)據(jù)處理（外標法）和打印
5.5.1. 右擊系統(tǒng)主界面下的『Browse Project』圖標，選擇相應(yīng)的項目，按「OK」進入Project窗口，選〈Channels〉標簽。
5.5.2. 建立處理方法　選擇一個待積分的標準，右擊后選“Review”進入Review窗口。按「Processing Method Wizard」圖標（左邊第一個）進入New Processing Method向?qū)Т翱冢础窸K」。
5.5.2.1. 劃入一個感興趣的最窄的峰，按「Next>」；
5.5.2.2. 劃入一段包含噪聲的基線，按「Next>」；
5.5.2.3. 劃入一段要積分的區(qū)間，按「Next>」；
5.5.2.4. 根據(jù)情況選擇最小峰面積和最小峰高，按「Next>」、「Next>」；
5.5.2.5. 在Name檔內(nèi)輸入各組分峰的名稱，按「Next>」、「Next>」；
5.5.2.6. 在Method Name檔內(nèi)填寫方法名稱，按「Finish」。退出Review窗口。
5.5.3. 修改標準　選中所有標準，右擊后選“Alter Sample”進入Alter Sample窗口。
5.5.3.1. 在Sample Type檔內(nèi)將Unknown改成Standard；
5.5.3.2. 按「Amount」圖標（左上第六個）進入Component Editor窗口；
5.5.3.3. 按「Copy from Process Method」圖標（左上第五個），選擇剛建立的處理方法，按「Open」，在Value和Units檔內(nèi)分別輸入標準所含各組分的數(shù)值和單位，完成后按「OK」回到Alter Sample窗口；
5.5.3.4. 按「Save」圖標存盤，退出Alter Sample窗口。
5.5.4. 積分　先選中所有標準，再選中所有未知樣品，右擊后選“Process”進入Background Processing & Reporting窗口，選Use specified processing methods，在右邊檔內(nèi)選擇剛建立的處理方法，按「OK」。
5.5.5. 打印　在Project窗口下選〈Results〉標簽。
5.5.5.1. 選中要打印的標準/樣品，右擊后選“Preview”進入Open Report Method窗口，選合適的打印方法，按「OK」進入Report Publisher (Preview)窗口，預(yù)覽打印的結(jié)果。按打印(Print)圖標（左上第二個）即可打印結(jié)果。
5.5.5.2. 按「Close」可進入Report Publisher窗口對報告方法進行修改，完成后按「Print」圖標（右數(shù)第二個）即可打印結(jié)果。
5.5.6. 數(shù)據(jù)處理完成后，關(guān)閉所有窗口，在主界面下按「Logout」退出系統(tǒng)，關(guān)閉Millennium32軟件，再依次關(guān)閉電腦主機、顯示器、打印機。
5.6. 清洗系統(tǒng)和關(guān)機
5.6.1. 數(shù)據(jù)采集完畢后，關(guān)閉檢測器，繼續(xù)以工作流動相沖洗10min后，換水沖洗。
5.6.2. 清洗進樣閥
5.6.2.1. 用啟動注射器吸10ml超純水；
5.6.2.2. 將注射針導(dǎo)入口沖洗頭（Rheodyne部件號7125-054）連接到注射器出口上（不要針），并將它們一起接到進樣口上；
5.6.2.3. 使進樣閥保持在Inject位置，慢慢將水推入，水將通過注射針導(dǎo)入口、引導(dǎo)管、注射針導(dǎo)入管和注射針密封圈，由樣品溢出管排出。
5.6.3. 清洗柱
5.6.3.1. C18柱先用超純水以1ml/min沖洗40min以上，再用甲醇或乙腈沖洗20min。
5.6.3.2. Protein PAK60柱先用超純水沖洗90min以上，再用甲醇或乙腈沖洗40min。
5.6.4. 用水沖洗柱后，分別用20ml超純水沖洗柱塞桿外部和法蘭盤上小孔。
5.6.5. 清洗完成后，先將流速降到0，再依次關(guān)閉泵、脫氣機、UPS，斷開電源。
5.6.6. 填寫使用記錄。