液相計量檢定人員考核題解

一、填充題：
1.
液相色譜儀的流動相常用的脫氣方法有：超聲波脫氣法、加熱回流法、抽真空脫氣法、

吹氦脫氣法、和在線真空脫氣法幾種。
2.
JJG705-2002檢定規程規定，用重鉻酸鉀高氯酸溶液 檢定紫外-可見光檢測器的波長示
值誤差和重復性，用 萘、甲醇溶液 檢定熒光檢測器的波長示值誤差和重復性。
3.JJG705-2002檢定規程規定，檢定可調波長熒光檢測器的波長示值誤差和波長重復性時，
激發波長為 345nm ，發射波長為455nm 。
4.液相色譜儀是利用試樣中各組分在色譜柱內固定相和流動相間分配或吸附特性的差異，將
試樣中各組份進行分離的。
5.在反相鍵合色譜體系中，鍵合固定相 的極性小于 流動相 的極性。
6.JJG705-2002檢定規程規定，熒光檢測器波長示值誤差優于 ±5nm ，波長重復性誤差優
于2nm
。

7.色譜柱柱效下降，則色譜峰保留時間變長，色譜峰峰寬變大 。
8. 當被分析的樣品濃度足夠低時，熒光強度與入射光強度、量子效率及樣品濃度
呈線性關系。
9.示差折光率檢測器受溫度和流量波動影響較大，一般不能進行梯度洗脫。
10.JJG705-2002檢定規程規定，用萘/甲醇溶液檢定紫外-可見光檢測器的最小檢測濃度，
用丙甲醇/水溶液檢定示差折光率檢測器的最小檢測濃度。
11.JJG705-2002檢定規程規定，檢定熒光檢測器的最小檢測濃度時，激發波長為345nm，發
射 波長為 455nm 。
12.JJG705-2002檢定規程規定，紫外-可見光檢測器波長示值誤差不超過±2nm，波長重復
性誤差優于2nm
。


13.反相色譜體系中，常用的流動相有水、甲醇、乙腈。
14.液相色譜儀是依據被測樣品中各組份的保留時間和響應值（峰面積或峰高）進行定性

和定量分析的。
15. JJG705-2002檢定規程規定，示差折光檢測器的基線噪聲應不超過5×10－7RIU，基線
漂移應不超過5×10－6RIU/h
。
16.在線性范圍內，紫外-可見光檢測器測得的吸光度與被測組分的摩爾吸收系數、摩爾濃度
及樣品池光路長度成正比。
17. JJG705-2002檢定規程規定，紫外-可見光檢測器的基線噪聲應不超過5×10－4AU，基
線漂移應不超過 5×10－3AU/h。
18.JJG705-2002檢定規程適用于配有紫外-可見光檢測器、二極管陣列檢測器、熒光檢測器
和示差折光率檢測器的液相色譜儀。
19.用作液相色譜儀流動相的溶劑，在進入色譜系統前，必須經過過濾和脫氣。
20.液相色譜儀由輸液系統、進樣器、色譜柱、檢測器和數據記錄處理裝置等幾部分組成。
二、選擇題：
1.JJG705-2002檢定規程規定，紫外可見光檢測器的基線噪聲應不超過
A
。
A.5×10-4 AU
B.5×10-3 AU
C.5×10-5AU

2.JJG705-2002檢定規程中‘線性范圍的檢定’的條款中，檢測下限cL的測量方法
為
A
。
A.采用最小檢測濃度的測量方法，用丙酮的最小檢測濃度為檢測下限cL。
B.在測量線性范圍工作曲線中，取響應值為兩倍噪聲處相對應的濃度為檢測下限cL
C. 在測量線性范圍工作曲線中，取響應值與噪聲相等處相對應的濃度為檢測下限cL


3.熒光檢測器屬于
B
。
A.通用型檢測器
B.選擇性檢測器
C. 兩者都不是
4．對多組份混合物的分離，色譜柱越長分離
B
。

A.越差
B. 越好
C. 越快

5.檢定可調波長熒光檢測器波長示值誤差和波長重復性時，所用的波長標準為： A
。
A.萘的甲醇溶液
B.硫酸奎寧溶液
C.重鉻酸鉀溶液
6.檢定紫外-可見光檢測器的最小檢測濃度時，流動相為
B
。
A.90%乙腈
B.100%甲醇
C.HPLC水

7.JJG705-2002檢定規程規定，流量為1.00mi/min時，泵流量設定值誤差SS應小于： B
。
A.2%
B.3%
C.5%
8.JJG705-2002檢定規程規定，示差折光率檢測器的基線噪聲應不超過
B
。
A.5×10-6 RIU
B.5×10-7 RIU
C.5×10-8RIU

9.JJG705-2002檢定規程規定，熒光檢測器的波長示值誤差應不超過
C
。
A.±2nm
B.
±3nm
C.
±5nm

10.JJG705-2002檢定規程中,檢定紫外-可見光檢測器波長示值誤差和重復性的標準波長
為
C
。
A.257nm和320nm
B.254nm和300nm

C.257nm和350nm

11.JJG705-2002檢定規程規定，用硫酸奎寧硫酸水溶液測得的熒光檢測器的最小檢測濃度
應不超過
B
。
A.1×10-8 g/ml
B.1×10-9 g/ml
C.1×10-10g/ml

12.檢定液相色譜儀的環境條件為：室溫

A
。
A.15～30℃
B.15～35℃

C. 10～30℃

13.檢定紫外-可見光檢測器波長示值誤差和波長重復性時，所用的波長標準為： C
。

A.萘的甲醇溶液
B.硫酸奎寧溶液
C.重鉻酸鉀溶液
14.液相色譜儀除按檢定周期檢定外，有下列情況的應隨時檢定： A
。

A.儀器經修理后
B.更換色譜柱后
C.更換記錄儀后

15.JJG705-2002檢定規程規定，流量為0.5mi/min時，泵流量設定值誤差SS應小于： C
。
A.2%
B.3%
C.5%
16.配有
C
的液相色譜儀不能采用梯度洗脫。
A. 紫外-可見光檢測器

B. 熒光檢測器
C. 示差折光率檢測器

17.熒光檢測器的工作原理是： A
。
A.化合物分子的光致發光現象
B.某些合物分子會發熒光
C. 化合物分子對光有吸收

18．目前使用的液相色譜儀的流動相含有pH緩沖鹽，要將流動相轉換為純甲醇，應當 B
。

A.直接將貯液瓶內的流動相換成甲醇

B.先用水沖洗輸液系統，將管路沖凈后再將流動相換為甲醇

C.以上方法都可以

19.十八烷基鍵合相屬于
B
固定相。
A.液-液分配色譜
B.液-固吸附色譜
C.離子交換色譜
20.為了使未完全分開的色譜峰更好地分離，一般采用
A
的方法：
A.改變流動相極性
B. 改變流速
C. 改變柱溫


三、問答題：
1．梯度洗脫的作用是什么？試述梯度誤差的檢定方法及計算公式？
答：梯度洗脫的作用是使溶劑強度在色譜過程中逐漸增加。梯度誤差的檢定方法：由梯度控制裝置設置階梯式的梯度洗脫程序，A溶劑為水，B溶劑為含0.1%丙酮的水溶液，B經由五個階梯從0變到100％，輸液泵和檢測器連接（不接色譜柱）開機后用啊溶劑沖洗系統，基線平穩后開始執行梯度程序，畫出梯度變化曲線。求出阿A、B溶劑不同比例時的輸出信號值（或記錄儀讀數），重復測量二次，計算平均值。從B溶劑的含量及對應的輸出信號值（或記錄儀讀數）計算梯度誤差Gci，取Gci最大者作為儀器梯度誤差。其公式是：


Gci=(Li-Lm)/Lm×100％

2.為什么用作液相色譜儀流動相的溶劑，在使用前必須經過脫氣？常用的脫氣方法有哪些？
答：流動相進行脫氣是為了除去其中溶解的氣體（如O2），以防止洗脫過程中流動相由色譜柱流至檢測器時因壓力降低而產生氣泡。在低死體積檢測池中，存在氣泡會增加基線噪聲，甚至造成分析靈敏度下降。此外，溶解在流動相中的氧氣，會造成熒光猝滅，影響檢測，還會導致樣品中某些組分氧化使柱中固定相降解而改變柱的分離性能。

常用脫氣方法有五種：1、加熱回流法；2、抽真空脫氣法；3、吹氦脫氣法；4、超聲波脫氣法；5、在線真空脫氣法。

3.檢定液相色譜儀的計量性能應做的檢定項目包括哪些？
答：液相色譜儀計量性能檢定項目包括四部分：

1、泵耐壓、泵流量設定值誤差、泵流量穩定性誤差和梯度誤差；

2、柱箱溫度設定誤差、柱箱溫度穩定性；

3、檢測器基線噪聲、基線漂移、最小檢測濃度、波長示值誤差和重復性、線性范圍和換擋誤差；

4、整機定性定量重復性。

4.敘述紫外-可見光檢測器的工作原理，最小檢測濃度的檢定方法步驟及計算公式。
A、答：紫外-可見光檢測器的原理是基于郎伯－比爾定律，通過測定樣品在檢測池中吸收紫外－可見光的大小來確定樣品的含量。

最小檢測濃度的檢定：采用測量基線噪聲的色譜條件、方法測量基線噪聲。然后，在相同色譜條件下用微量注射器從進樣口注入10－20μl標樣，記錄色譜圖，由色譜峰高和基線噪聲峰－峰高，計算最小檢測濃度。

公式：CL=2NdC×V/H×20

B、答：物質分子吸收紫外輻射是由于分子體系中外層電子激發到較高能態引起的，這一過程遵從郎伯－比爾定律，紫外檢測器是利用上述原理。以恰當光路、電路設計，輸出與樣品濃度成正比的光吸收值信號。在樣品池光路長度一定時，樣品摩爾吸收系數越大，靈敏度越高。摩爾吸收系數大小與波長和樣品的性質有關，它表明物質分子對特定波長輻射的吸收能力。在波長一定時，樣品摩爾吸收系數由分子截面和躍遷幾率決定。

最小檢測濃度的檢定：選用C18色譜柱，以100％甲醇為流動相，流量為1.0ml/min，檢測器波長為254nm,開機預熱，待儀器穩定后記錄基線30min, 然后，在相同色譜條件下用微量注射器從進樣口注入10－20μl標樣，記錄色譜圖，由色譜峰高和基線噪聲峰－峰高，計算最小檢測濃度。

公式：CL=2NdC×V/H×20

5．簡述熒光檢測器的工作原理，及熒光檢測器的線性范圍的檢定方法。
答：因為許多化合物存在光致發光現象，即它們可被入射光（激發光）所激發并再發出波長相同的共振輻射或波長較長的特征輻射。熒光檢測器就是基于測量這種波長較長的特征輻射的強度。當被分析的樣品濃度足夠低時，熒光強度與入射光強度，量子效率及樣品濃度呈線性關系。

檢測熒光檢測器的線性范圍時檢測器的激發波長為345，發射波長為455，。儀器穩定后，用注射器向檢測池中注入0.05mol/L的高氯酸水溶液，沖洗檢測池至儀器讀數不變，記下讀數。然后依次注入1×10－5，2×10－5，3×10－5，――1×10－4g/ml的硫酸奎寧/高氯酸水溶液，記下對應讀數，重復測量三遍，取平均值。取含量1×10－5g/mL～5×10－5g/mL的五個樣品的讀數作標準曲線，在曲線上找出樣品含量大于1×10－5g/mL的各點讀數與測量值比較，測量值與曲線讀數差5％時的樣品含量為檢測上限。檢測上限與最小檢測濃度（即檢測下限之比值即為檢測器的線性范圍。

6.使用配有示差折光率檢測器應注意什么？
答：因為示差折光檢測器對環境條件如溫度、流量波動等要求較嚴，故一般不能用梯度洗脫操作。

四、計算題：
1.檢定某一臺島津公司生產的SPD-10A液相色譜儀紫外檢測器，使用滿量程為1mV的積分儀，在測量基線時，信號從10mVFS端輸出，檢測器的測量范圍(RANGE)為0.0005AUFS,積分儀的衰減ATT=20,從積分儀上測得基線噪聲為0.16mV,1小時內基線漂移為0.40mV/h ，測量最小檢測濃度時，用微量注射器從進樣口注入10μl濃度為1.00× 10-7g/ml的萘/甲醇溶液，信號從1V端輸出,且1V =0.5AU,RANGE為0.1AUFS,積分儀的衰減為ATT=20，從積分儀上測得樣品峰的峰高為0.42mV(測量前已校零)，求：基線噪聲，基線漂移和最小檢測濃度。
解：基線噪聲
Nd=KB
最小檢測濃度
CL=2NdC×V/H×20
ATT＝20
10mv＝0.0005AU
1mv＝0.00005AU＝5×10-5AU
基線噪聲
Nd＝0.16×5×10-5＝1.6×5×10-6＝8×10-6AU
基線漂移 D＝0.40×5×10-5＝2×10-5AU/h
ATT＝20
1V=0.5AU
0.42MV＝0.00042V＝4.2×10-4V
峰高H＝4.2×10-4×0.5＝2.1×10-4AU
最小檢測濃度
CL＝2NdC×V/H×20＝2×8×10-6×1×10-7×10/2.1×10-4×20＝3.81×10-9g/ml

2．檢定某一臺WATERS公司生產的2410型液相色譜儀示差折光率檢測器，色譜條件按檢定規程設定，信號從Recorder Out端輸出，用滿量程為1 mV的積分儀記錄信號（積分儀衰減為20）。此時輸出信號（mV）與檢測器折光率的變化Δn（RIU）的關系為：輸出信號(mV)=2000×SF×S×Δn（RIU）
先將檢測器參數設為S=64、SF=80，記錄基線，測得基線噪聲為0.205 mV,半小時內基線漂移為0.755 mV。再將檢測器參數設為S=16、SF=20，用微量注射器從進樣器注入10μl

1.00× 10-5g/ml的丙三醇標準溶液，從積分儀上得到相應的色譜峰峰高為203785μV。
求：基線噪聲，基線漂移和最小檢測濃度。
解：基線噪聲
Nd=KB
最小檢測濃度
CL=2NdC×V/H×20
ATT＝20
1MV=2000×80×64×Δn


基線噪聲: Nd＝0.205/2000×80×64＝2×10-8RIU

基線漂移: D＝2×0.755/2000×80×64＝1.5×10-7RIU/h
203785μV＝203.785mv
峰高:H＝203.785/2000×20×16＝3.2×10-4RIU
最小檢測濃度:
CL＝2NdC×V/H×20＝2×2×10-8×1×10-5×10/3.2×10-4×20
＝0.629×10-9g/ml＝6.3×10-10g/ml

3．按照JJG705-2002檢定規程用丙三醇標準溶液對某臺配有示差折光率檢測器進行的液相色譜儀進行線性范圍檢定。用靜態法重復測量三次，取平均值，得到與丙三醇濃度(g/ml)相應的檢測器讀數(RIU)（見表）：

丙三醇濃度X ×10-3(g/ml)	1.0	2.0	3.0	4.0	5.0	6.0	7.0	8.0	9.0	10.0
讀數平均值 ×10-3(RIU)	4.1	8.9	13.7	16.9	21.7	24.9	28.1	31.3	34.5	39.3

用動態法測得該檢測器丙三醇的最小檢測濃度cl為5.0× 10-8g/ml，求該檢測器的線性范圍。
解：最小檢測濃度
CL=2NdC×V/H×20
按照檢定規程的計算方法，取其前5組數據，用最小二乘法計算：

設方程為：Y=a+bX


-X=ΣXi/5=3
-Y=ΣYi/5=13.06
n=5

Σ(Xi--X)(Yi--Y)=(1-3)*(4.1-13.06)+(2-3)*(8.9-13.06)+(3-3)*(13.7-13.06)+(4-3)*(16.9-13.06)+ (5-3)*(21.7-13.06)=17.92+4.16+3.84+17.28=43.2

Σ(Xi--X)2=(1-3)2+(2-3)2+(3-3)2+(4-3)2+(5-3)2=10
b=4.32
a=-Y-b-X=13.06-12.96=0.1
得到一線性方程：Y = 4.32X + 0.1 。
將第6點至第10點的濃度代入線性方程，計算理論響應值Ys及測得值與理論值的偏差：
第6點Ys= 4.32×6.0+ 0.1=26.02
(Y-Ys)/ Ys×100％=(24.9-26.02)/26.02×100％=-4.3%<-5%
第7點Ys= 4.32×7.0+ 0.1=30.34
(Y-Ys)/ Ys×100％=(28.1-30.34)/30.34×100％=-7.4%>-5%
∴檢測上限ＣH=7.0×10-3g/ml,
該檢測器的線性范圍 = ＣH/Ｃl=7.0×10-3/5.0× 10-8=1.4×105

4.檢定某一液相色譜儀的泵性能，設定泵流量為1ml/min，連續測量泵流量Fm三次，測得數據為：1.0075ml/min,1.0087ml/min,1.0091ml/min。求：泵流量設定值誤差SS和泵流量穩定性誤差SR：
解：Ss=(Fm-Fs)/Fs×100％
SR=(Fmax-Fmin)/Fm×100％

-
Fm=(1.0075+1.0087+1.0091)/3=1.0084
Ss=(-Fm-Fs)/Fs×100％=(1.0084-1)/1×100%=0.84%

SR=(Fmax-Fmin)/ -Fm×100％=(1.0091-1.0075)/1.0084×100%=0.16%

5．按照JJG705-2002檢定規程的方法對某臺液相色譜儀進行梯度誤差檢定，得到如下實驗數據：

B溶液變化范圍(%)		20	40	60	80	100
記錄儀讀數	1	0．0180	0．0185	0．0185	0．0180	0．0190
	2	0．0180	0．0190	0．0190	0．0180	0．0180
	Li
Lm
Gci(%)
儀器的梯度誤差(%)

請按照檢定規程中梯度誤差的計算方法將表格填寫完整。
解：GCi=（Li-Lm）/Lm×100％
GCi=（-Li--Lm）/-Lm×100％=(0.018-0.0184)/0.0184×100%=-2.17%

6．檢定液相色譜儀定性 、定量重復性(共測6次)，得到數據如下表所示：

保留時間t(min)	1.796	1.794	1.796	1.794	1.790	1.793
峰面積A(Vs)	3.716	3.740	3.734	3.752	3.739	3.760

求：.液相色譜儀的定性 、定量重復性誤差。
解：
RSD6=√∑(Xi-X)2/(6-1)×1/X×100％
-t=(1.796+1.794+1.796+1.794+1.790+1.793)/6=1.794

-A=(3.716+3.740+3.734+3.752+3.739+3.760)/6=3.74
RSD定性=√∑(ti--t)2/(6-1)/-t×100％=0.125%
RSD定量=√∑(Ai--A)2/(6-1)/-A×100％=0.406%

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