液相計(jì)量檢定人員考核題解

一、填充題：
1.
液相色譜儀的流動相常用的脫氣方法有：超聲波脫氣法、加熱回流法、抽真空脫氣法、

吹氦脫氣法、和在線真空脫氣法幾種。
2.
JJG705-2002檢定規(guī)程規(guī)定，用重鉻酸鉀高氯酸溶液 檢定紫外-可見光檢測器的波長示
值誤差和重復(fù)性，用 萘、甲醇溶液 檢定熒光檢測器的波長示值誤差和重復(fù)性。
3.JJG705-2002檢定規(guī)程規(guī)定，檢定可調(diào)波長熒光檢測器的波長示值誤差和波長重復(fù)性時(shí)，
激發(fā)波長為 345nm ，發(fā)射波長為455nm 。
4.液相色譜儀是利用試樣中各組分在色譜柱內(nèi)固定相和流動相間分配或吸附特性的差異，將
試樣中各組份進(jìn)行分離的。
5.在反相鍵合色譜體系中，鍵合固定相 的極性小于 流動相 的極性。
6.JJG705-2002檢定規(guī)程規(guī)定，熒光檢測器波長示值誤差優(yōu)于 ±5nm ，波長重復(fù)性誤差優(yōu)
于2nm
。

7.色譜柱柱效下降，則色譜峰保留時(shí)間變長，色譜峰峰寬變大 。
8. 當(dāng)被分析的樣品濃度足夠低時(shí)，熒光強(qiáng)度與入射光強(qiáng)度、量子效率及樣品濃度
呈線性關(guān)系。
9.示差折光率檢測器受溫度和流量波動影響較大，一般不能進(jìn)行梯度洗脫。
10.JJG705-2002檢定規(guī)程規(guī)定，用萘/甲醇溶液檢定紫外-可見光檢測器的最小檢測濃度，
用丙甲醇/水溶液檢定示差折光率檢測器的最小檢測濃度。
11.JJG705-2002檢定規(guī)程規(guī)定，檢定熒光檢測器的最小檢測濃度時(shí)，激發(fā)波長為345nm，發(fā)
射 波長為 455nm 。
12.JJG705-2002檢定規(guī)程規(guī)定，紫外-可見光檢測器波長示值誤差不超過±2nm，波長重復(fù)
性誤差優(yōu)于2nm
。


13.反相色譜體系中，常用的流動相有水、甲醇、乙腈。
14.液相色譜儀是依據(jù)被測樣品中各組份的保留時(shí)間和響應(yīng)值（峰面積或峰高）進(jìn)行定性

和定量分析的。
15. JJG705-2002檢定規(guī)程規(guī)定，示差折光檢測器的基線噪聲應(yīng)不超過5×10－7RIU，基線
漂移應(yīng)不超過5×10－6RIU/h
。
16.在線性范圍內(nèi)，紫外-可見光檢測器測得的吸光度與被測組分的摩爾吸收系數(shù)、摩爾濃度
及樣品池光路長度成正比。
17. JJG705-2002檢定規(guī)程規(guī)定，紫外-可見光檢測器的基線噪聲應(yīng)不超過5×10－4AU，基
線漂移應(yīng)不超過 5×10－3AU/h。
18.JJG705-2002檢定規(guī)程適用于配有紫外-可見光檢測器、二極管陣列檢測器、熒光檢測器
和示差折光率檢測器的液相色譜儀。
19.用作液相色譜儀流動相的溶劑，在進(jìn)入色譜系統(tǒng)前，必須經(jīng)過過濾和脫氣。
20.液相色譜儀由輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器和數(shù)據(jù)記錄處理裝置等幾部分組成。
二、選擇題：
1.JJG705-2002檢定規(guī)程規(guī)定，紫外可見光檢測器的基線噪聲應(yīng)不超過
A
。
A.5×10-4 AU
B.5×10-3 AU
C.5×10-5AU

2.JJG705-2002檢定規(guī)程中‘線性范圍的檢定’的條款中，檢測下限cL的測量方法
為
A
。
A.采用最小檢測濃度的測量方法，用丙酮的最小檢測濃度為檢測下限cL。
B.在測量線性范圍工作曲線中，取響應(yīng)值為兩倍噪聲處相對應(yīng)的濃度為檢測下限cL
C. 在測量線性范圍工作曲線中，取響應(yīng)值與噪聲相等處相對應(yīng)的濃度為檢測下限cL


3.熒光檢測器屬于
B
。
A.通用型檢測器
B.選擇性檢測器
C. 兩者都不是
4．對多組份混合物的分離，色譜柱越長分離
B
。

A.越差
B. 越好
C. 越快

5.檢定可調(diào)波長熒光檢測器波長示值誤差和波長重復(fù)性時(shí)，所用的波長標(biāo)準(zhǔn)為： A
。
A.萘的甲醇溶液
B.硫酸奎寧溶液
C.重鉻酸鉀溶液
6.檢定紫外-可見光檢測器的最小檢測濃度時(shí)，流動相為
B
。
A.90%乙腈
B.100%甲醇
C.HPLC水

7.JJG705-2002檢定規(guī)程規(guī)定，流量為1.00mi/min時(shí)，泵流量設(shè)定值誤差SS應(yīng)小于： B
。
A.2%
B.3%
C.5%
8.JJG705-2002檢定規(guī)程規(guī)定，示差折光率檢測器的基線噪聲應(yīng)不超過
B
。
A.5×10-6 RIU
B.5×10-7 RIU
C.5×10-8RIU

9.JJG705-2002檢定規(guī)程規(guī)定，熒光檢測器的波長示值誤差應(yīng)不超過
C
。
A.±2nm
B.
±3nm
C.
±5nm

10.JJG705-2002檢定規(guī)程中,檢定紫外-可見光檢測器波長示值誤差和重復(fù)性的標(biāo)準(zhǔn)波長
為
C
。
A.257nm和320nm
B.254nm和300nm

C.257nm和350nm

11.JJG705-2002檢定規(guī)程規(guī)定，用硫酸奎寧硫酸水溶液測得的熒光檢測器的最小檢測濃度
應(yīng)不超過
B
。
A.1×10-8 g/ml
B.1×10-9 g/ml
C.1×10-10g/ml

12.檢定液相色譜儀的環(huán)境條件為：室溫

A
。
A.15～30℃
B.15～35℃

C. 10～30℃

13.檢定紫外-可見光檢測器波長示值誤差和波長重復(fù)性時(shí)，所用的波長標(biāo)準(zhǔn)為： C
。

A.萘的甲醇溶液
B.硫酸奎寧溶液
C.重鉻酸鉀溶液
14.液相色譜儀除按檢定周期檢定外，有下列情況的應(yīng)隨時(shí)檢定： A
。

A.儀器經(jīng)修理后
B.更換色譜柱后
C.更換記錄儀后

15.JJG705-2002檢定規(guī)程規(guī)定，流量為0.5mi/min時(shí)，泵流量設(shè)定值誤差SS應(yīng)小于： C
。
A.2%
B.3%
C.5%
16.配有
C
的液相色譜儀不能采用梯度洗脫。
A. 紫外-可見光檢測器

B. 熒光檢測器
C. 示差折光率檢測器

17.熒光檢測器的工作原理是： A
。
A.化合物分子的光致發(fā)光現(xiàn)象
B.某些合物分子會發(fā)熒光
C. 化合物分子對光有吸收

18．目前使用的液相色譜儀的流動相含有pH緩沖鹽，要將流動相轉(zhuǎn)換為純甲醇，應(yīng)當(dāng) B
。

A.直接將貯液瓶內(nèi)的流動相換成甲醇

B.先用水沖洗輸液系統(tǒng)，將管路沖凈后再將流動相換為甲醇

C.以上方法都可以

19.十八烷基鍵合相屬于
B
固定相。
A.液-液分配色譜
B.液-固吸附色譜
C.離子交換色譜
20.為了使未完全分開的色譜峰更好地分離，一般采用
A
的方法：
A.改變流動相極性
B. 改變流速
C. 改變柱溫


三、問答題：
1．梯度洗脫的作用是什么？試述梯度誤差的檢定方法及計(jì)算公式？
答：梯度洗脫的作用是使溶劑強(qiáng)度在色譜過程中逐漸增加。梯度誤差的檢定方法：由梯度控制裝置設(shè)置階梯式的梯度洗脫程序，A溶劑為水，B溶劑為含0.1%丙酮的水溶液，B經(jīng)由五個(gè)階梯從0變到100％，輸液泵和檢測器連接（不接色譜柱）開機(jī)后用啊溶劑沖洗系統(tǒng)，基線平穩(wěn)后開始執(zhí)行梯度程序，畫出梯度變化曲線。求出阿A、B溶劑不同比例時(shí)的輸出信號值（或記錄儀讀數(shù)），重復(fù)測量二次，計(jì)算平均值。從B溶劑的含量及對應(yīng)的輸出信號值（或記錄儀讀數(shù)）計(jì)算梯度誤差Gci，取Gci最大者作為儀器梯度誤差。其公式是：


Gci=(Li-Lm)/Lm×100％

2.為什么用作液相色譜儀流動相的溶劑，在使用前必須經(jīng)過脫氣？常用的脫氣方法有哪些？
答：流動相進(jìn)行脫氣是為了除去其中溶解的氣體（如O2），以防止洗脫過程中流動相由色譜柱流至檢測器時(shí)因壓力降低而產(chǎn)生氣泡。在低死體積檢測池中，存在氣泡會增加基線噪聲，甚至造成分析靈敏度下降。此外，溶解在流動相中的氧氣，會造成熒光猝滅，影響檢測，還會導(dǎo)致樣品中某些組分氧化使柱中固定相降解而改變柱的分離性能。

常用脫氣方法有五種：1、加熱回流法；2、抽真空脫氣法；3、吹氦脫氣法；4、超聲波脫氣法；5、在線真空脫氣法。

3.檢定液相色譜儀的計(jì)量性能應(yīng)做的檢定項(xiàng)目包括哪些？
答：液相色譜儀計(jì)量性能檢定項(xiàng)目包括四部分：

1、泵耐壓、泵流量設(shè)定值誤差、泵流量穩(wěn)定性誤差和梯度誤差；

2、柱箱溫度設(shè)定誤差、柱箱溫度穩(wěn)定性；

3、檢測器基線噪聲、基線漂移、最小檢測濃度、波長示值誤差和重復(fù)性、線性范圍和換擋誤差；

4、整機(jī)定性定量重復(fù)性。

4.敘述紫外-可見光檢測器的工作原理，最小檢測濃度的檢定方法步驟及計(jì)算公式。
A、答：紫外-可見光檢測器的原理是基于郎伯－比爾定律，通過測定樣品在檢測池中吸收紫外－可見光的大小來確定樣品的含量。

最小檢測濃度的檢定：采用測量基線噪聲的色譜條件、方法測量基線噪聲。然后，在相同色譜條件下用微量注射器從進(jìn)樣口注入10－20μl標(biāo)樣，記錄色譜圖，由色譜峰高和基線噪聲峰－峰高，計(jì)算最小檢測濃度。

公式：CL=2NdC×V/H×20

B、答：物質(zhì)分子吸收紫外輻射是由于分子體系中外層電子激發(fā)到較高能態(tài)引起的，這一過程遵從郎伯－比爾定律，紫外檢測器是利用上述原理。以恰當(dāng)光路、電路設(shè)計(jì)，輸出與樣品濃度成正比的光吸收值信號。在樣品池光路長度一定時(shí)，樣品摩爾吸收系數(shù)越大，靈敏度越高。摩爾吸收系數(shù)大小與波長和樣品的性質(zhì)有關(guān)，它表明物質(zhì)分子對特定波長輻射的吸收能力。在波長一定時(shí)，樣品摩爾吸收系數(shù)由分子截面和躍遷幾率決定。

最小檢測濃度的檢定：選用C18色譜柱，以100％甲醇為流動相，流量為1.0ml/min，檢測器波長為254nm,開機(jī)預(yù)熱，待儀器穩(wěn)定后記錄基線30min, 然后，在相同色譜條件下用微量注射器從進(jìn)樣口注入10－20μl標(biāo)樣，記錄色譜圖，由色譜峰高和基線噪聲峰－峰高，計(jì)算最小檢測濃度。

公式：CL=2NdC×V/H×20

5．簡述熒光檢測器的工作原理，及熒光檢測器的線性范圍的檢定方法。
答：因?yàn)樵S多化合物存在光致發(fā)光現(xiàn)象，即它們可被入射光（激發(fā)光）所激發(fā)并再發(fā)出波長相同的共振輻射或波長較長的特征輻射。熒光檢測器就是基于測量這種波長較長的特征輻射的強(qiáng)度。當(dāng)被分析的樣品濃度足夠低時(shí)，熒光強(qiáng)度與入射光強(qiáng)度，量子效率及樣品濃度呈線性關(guān)系。

檢測熒光檢測器的線性范圍時(shí)檢測器的激發(fā)波長為345，發(fā)射波長為455，。儀器穩(wěn)定后，用注射器向檢測池中注入0.05mol/L的高氯酸水溶液，沖洗檢測池至儀器讀數(shù)不變，記下讀數(shù)。然后依次注入1×10－5，2×10－5，3×10－5，――1×10－4g/ml的硫酸奎寧/高氯酸水溶液，記下對應(yīng)讀數(shù)，重復(fù)測量三遍，取平均值。取含量1×10－5g/mL～5×10－5g/mL的五個(gè)樣品的讀數(shù)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，在曲線上找出樣品含量大于1×10－5g/mL的各點(diǎn)讀數(shù)與測量值比較，測量值與曲線讀數(shù)差5％時(shí)的樣品含量為檢測上限。檢測上限與最小檢測濃度（即檢測下限之比值即為檢測器的線性范圍。

6.使用配有示差折光率檢測器應(yīng)注意什么？
答：因?yàn)槭静钫酃鈾z測器對環(huán)境條件如溫度、流量波動等要求較嚴(yán)，故一般不能用梯度洗脫操作。

四、計(jì)算題：
1.檢定某一臺島津公司生產(chǎn)的SPD-10A液相色譜儀紫外檢測器，使用滿量程為1mV的積分儀，在測量基線時(shí)，信號從10mVFS端輸出，檢測器的測量范圍(RANGE)為0.0005AUFS,積分儀的衰減ATT=20,從積分儀上測得基線噪聲為0.16mV,1小時(shí)內(nèi)基線漂移為0.40mV/h ，測量最小檢測濃度時(shí)，用微量注射器從進(jìn)樣口注入10μl濃度為1.00× 10-7g/ml的萘/甲醇溶液，信號從1V端輸出,且1V =0.5AU,RANGE為0.1AUFS,積分儀的衰減為ATT=20，從積分儀上測得樣品峰的峰高為0.42mV(測量前已校零)，求：基線噪聲，基線漂移和最小檢測濃度。
解：基線噪聲
Nd=KB
最小檢測濃度
CL=2NdC×V/H×20
ATT＝20
10mv＝0.0005AU
1mv＝0.00005AU＝5×10-5AU
基線噪聲
Nd＝0.16×5×10-5＝1.6×5×10-6＝8×10-6AU
基線漂移 D＝0.40×5×10-5＝2×10-5AU/h
ATT＝20
1V=0.5AU
0.42MV＝0.00042V＝4.2×10-4V
峰高H＝4.2×10-4×0.5＝2.1×10-4AU
最小檢測濃度
CL＝2NdC×V/H×20＝2×8×10-6×1×10-7×10/2.1×10-4×20＝3.81×10-9g/ml

2．檢定某一臺WATERS公司生產(chǎn)的2410型液相色譜儀示差折光率檢測器，色譜條件按檢定規(guī)程設(shè)定，信號從Recorder Out端輸出，用滿量程為1 mV的積分儀記錄信號（積分儀衰減為20）。此時(shí)輸出信號（mV）與檢測器折光率的變化Δn（RIU）的關(guān)系為：輸出信號(mV)=2000×SF×S×Δn（RIU）
先將檢測器參數(shù)設(shè)為S=64、SF=80，記錄基線，測得基線噪聲為0.205 mV,半小時(shí)內(nèi)基線漂移為0.755 mV。再將檢測器參數(shù)設(shè)為S=16、SF=20，用微量注射器從進(jìn)樣器注入10μl

1.00× 10-5g/ml的丙三醇標(biāo)準(zhǔn)溶液，從積分儀上得到相應(yīng)的色譜峰峰高為203785μV。
求：基線噪聲，基線漂移和最小檢測濃度。
解：基線噪聲
Nd=KB
最小檢測濃度
CL=2NdC×V/H×20
ATT＝20
1MV=2000×80×64×Δn


基線噪聲: Nd＝0.205/2000×80×64＝2×10-8RIU

基線漂移: D＝2×0.755/2000×80×64＝1.5×10-7RIU/h
203785μV＝203.785mv
峰高:H＝203.785/2000×20×16＝3.2×10-4RIU
最小檢測濃度:
CL＝2NdC×V/H×20＝2×2×10-8×1×10-5×10/3.2×10-4×20
＝0.629×10-9g/ml＝6.3×10-10g/ml

3．按照J(rèn)JG705-2002檢定規(guī)程用丙三醇標(biāo)準(zhǔn)溶液對某臺配有示差折光率檢測器進(jìn)行的液相色譜儀進(jìn)行線性范圍檢定。用靜態(tài)法重復(fù)測量三次，取平均值，得到與丙三醇濃度(g/ml)相應(yīng)的檢測器讀數(shù)(RIU)（見表）：

丙三醇濃度X ×10-3(g/ml)	1.0	2.0	3.0	4.0	5.0	6.0	7.0	8.0	9.0	10.0
讀數(shù)平均值 ×10-3(RIU)	4.1	8.9	13.7	16.9	21.7	24.9	28.1	31.3	34.5	39.3

用動態(tài)法測得該檢測器丙三醇的最小檢測濃度cl為5.0× 10-8g/ml，求該檢測器的線性范圍。
解：最小檢測濃度
CL=2NdC×V/H×20
按照檢定規(guī)程的計(jì)算方法，取其前5組數(shù)據(jù)，用最小二乘法計(jì)算：

設(shè)方程為：Y=a+bX


-X=ΣXi/5=3
-Y=ΣYi/5=13.06
n=5

Σ(Xi--X)(Yi--Y)=(1-3)*(4.1-13.06)+(2-3)*(8.9-13.06)+(3-3)*(13.7-13.06)+(4-3)*(16.9-13.06)+ (5-3)*(21.7-13.06)=17.92+4.16+3.84+17.28=43.2

Σ(Xi--X)2=(1-3)2+(2-3)2+(3-3)2+(4-3)2+(5-3)2=10
b=4.32
a=-Y-b-X=13.06-12.96=0.1
得到一線性方程：Y = 4.32X + 0.1 。
將第6點(diǎn)至第10點(diǎn)的濃度代入線性方程，計(jì)算理論響應(yīng)值Ys及測得值與理論值的偏差：
第6點(diǎn)Ys= 4.32×6.0+ 0.1=26.02
(Y-Ys)/ Ys×100％=(24.9-26.02)/26.02×100％=-4.3%<-5%
第7點(diǎn)Ys= 4.32×7.0+ 0.1=30.34
(Y-Ys)/ Ys×100％=(28.1-30.34)/30.34×100％=-7.4%>-5%
∴檢測上限ＣH=7.0×10-3g/ml,
該檢測器的線性范圍 = ＣH/Ｃl=7.0×10-3/5.0× 10-8=1.4×105

4.檢定某一液相色譜儀的泵性能，設(shè)定泵流量為1ml/min，連續(xù)測量泵流量Fm三次，測得數(shù)據(jù)為：1.0075ml/min,1.0087ml/min,1.0091ml/min。求：泵流量設(shè)定值誤差SS和泵流量穩(wěn)定性誤差SR：
解：Ss=(Fm-Fs)/Fs×100％
SR=(Fmax-Fmin)/Fm×100％

-
Fm=(1.0075+1.0087+1.0091)/3=1.0084
Ss=(-Fm-Fs)/Fs×100％=(1.0084-1)/1×100%=0.84%

SR=(Fmax-Fmin)/ -Fm×100％=(1.0091-1.0075)/1.0084×100%=0.16%

5．按照J(rèn)JG705-2002檢定規(guī)程的方法對某臺液相色譜儀進(jìn)行梯度誤差檢定，得到如下實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)：

B溶液變化范圍(%)		20	40	60	80	100
記錄儀讀數(shù)	1	0．0180	0．0185	0．0185	0．0180	0．0190
	2	0．0180	0．0190	0．0190	0．0180	0．0180
	Li
Lm
Gci(%)
儀器的梯度誤差(%)

請按照檢定規(guī)程中梯度誤差的計(jì)算方法將表格填寫完整。
解：GCi=（Li-Lm）/Lm×100％
GCi=（-Li--Lm）/-Lm×100％=(0.018-0.0184)/0.0184×100%=-2.17%

6．檢定液相色譜儀定性 、定量重復(fù)性(共測6次)，得到數(shù)據(jù)如下表所示：

保留時(shí)間t(min)	1.796	1.794	1.796	1.794	1.790	1.793
峰面積A(Vs)	3.716	3.740	3.734	3.752	3.739	3.760

求：.液相色譜儀的定性 、定量重復(fù)性誤差。
解：
RSD6=√∑(Xi-X)2/(6-1)×1/X×100％
-t=(1.796+1.794+1.796+1.794+1.790+1.793)/6=1.794

-A=(3.716+3.740+3.734+3.752+3.739+3.760)/6=3.74
RSD定性=√∑(ti--t)2/(6-1)/-t×100％=0.125%
RSD定量=√∑(Ai--A)2/(6-1)/-A×100％=0.406%

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感謝分享。收藏了。就是有點(diǎn)老了，2002版的？

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非常感謝樓主，我下周要去培訓(xùn)了，剛好看看這套題。

謝謝樓主，辛苦了

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