生化分析儀是醫(yī)院常用的重要儀器設(shè)備,生化分析離不開(kāi)生化分析儀。隨著國(guó)民經(jīng)濟(jì)的高速發(fā)展,科學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步,以及國(guó)家對(duì)醫(yī)療衛(wèi)生的特別重視,全自動(dòng)生化分析儀的應(yīng)用越來(lái)越得到普及推廣,被各級(jí)醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)廣泛使用。這就為我們計(jì)量部門(mén)檢定生化分析儀帶來(lái)更高的技術(shù)要求。
JJG464-1996《生化分析儀檢定規(guī)程》相對(duì)于全自動(dòng)生化分析儀的檢定來(lái)說(shuō),有它一定的局限性,常常會(huì)讓檢定員感覺(jué)到檢定起來(lái)有些困難。筆者下面就全自動(dòng)生化分析儀吸光度準(zhǔn)確度的檢定談一點(diǎn)體會(huì)和看法。全自動(dòng)生化分析儀是以吸光度分析為基礎(chǔ),具有樣品取樣及加試劑、混合、保溫反應(yīng)等測(cè)定,分析過(guò)程監(jiān)控和數(shù)據(jù)處理及輸出能力實(shí)現(xiàn)全自動(dòng)化的儀器。我們對(duì)全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行檢定,就需要對(duì)具體儀器的測(cè)定計(jì)算方法有一定的了解。全自動(dòng)生化分析儀在各個(gè)吸光度讀數(shù)點(diǎn)讀取的吸光度數(shù)據(jù),并不一定都納入濃度計(jì)算。儀器往往根據(jù)定義和操作者設(shè)定的要求,對(duì)吸光度原始數(shù)據(jù)作計(jì)算處理,轉(zhuǎn)換成反應(yīng)數(shù)據(jù),再按系數(shù)或公式作濃度計(jì)算。其基本測(cè)定方法有終點(diǎn)法和速率法。終點(diǎn)法是根據(jù)反應(yīng)達(dá)到平衡時(shí)反應(yīng)產(chǎn)物的吸收光譜特征及其吸光度大小,對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定量分析的方法。在測(cè)定計(jì)算方式上,一般分為一點(diǎn)法和兩點(diǎn)法兩種。一點(diǎn)終點(diǎn)法是以試劑和樣品混合之前的空氣空白、水空白或試劑空白的吸光度值為測(cè)定計(jì)算基點(diǎn),以反應(yīng)終點(diǎn)的吸光度值減去空白讀數(shù),得到反應(yīng)吸光度。兩點(diǎn)終點(diǎn)法即終點(diǎn)-始點(diǎn)法,以試劑和樣品混合之后的某一時(shí)間點(diǎn)作為始點(diǎn),以反應(yīng)終點(diǎn)的吸光度值減去始點(diǎn)讀數(shù)。速率法又稱(chēng)連續(xù)監(jiān)測(cè)法,即連續(xù)監(jiān)測(cè)反應(yīng)過(guò)程,根據(jù)所測(cè)定的產(chǎn)物生成或底物消耗的速度進(jìn)行定量分析的方法。我們對(duì)全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行計(jì)量檢定,就是從儀器工作的最基本的原理著手,來(lái)判斷其計(jì)量性能是否合格。這其中,吸光度準(zhǔn)確度的檢定尤為重要。檢定其吸光度準(zhǔn)確度,規(guī)程要求用吸光度值為0.5和1.0的生化分析儀吸光度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),在波長(zhǎng)為340nm處進(jìn)行檢測(cè)。由于我們用的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)吸光度值為定值,這就要求我們?cè)跈z定時(shí)標(biāo)物的吸光度值不能發(fā)生變化。也就是說(shuō)標(biāo)物既不能被稀釋?zhuān)膊荒芘c試劑發(fā)生反應(yīng)。所以檢定時(shí)對(duì)儀器的設(shè)定非常關(guān)鍵。首先要求儀器能直接測(cè)定吸光度值(如測(cè)定為濃度值,則需要根據(jù)公式和系數(shù)算出吸光度值),其次要選用340nm波長(zhǎng)、一點(diǎn)終點(diǎn)法。然后將吸光度值為0.5和1.0的生化分析儀吸光度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)既作樣品又作試劑,分別用儀器測(cè)出其吸光度值。測(cè)出的吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值之差,應(yīng)該符合規(guī)程要求。由于多數(shù)全自動(dòng)生化分析儀可以在整個(gè)反應(yīng)周期內(nèi)連續(xù)監(jiān)測(cè)(如HITACHI7170常規(guī)測(cè)定周期10分鐘,監(jiān)測(cè)34點(diǎn);OLYMPUSAU600固定周期8分15秒,監(jiān)測(cè)27點(diǎn)),所以吸光度重復(fù)性可不再單獨(dú)測(cè)量,可直接由吸光度準(zhǔn)確度測(cè)量數(shù)據(jù)得出。
作者:宜昌市計(jì)量檢定測(cè)試所 萬(wàn)軍 黃敏 |
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