示差折光檢測器高效液相色譜儀的檢定操作規程

1. 說明
1.1. 適用范圍：適用于RID-10A型示差折光檢測器液相色譜儀校正。
1.2. 參照依據：依國家技術監督局JJG705-2002“實驗室液相色譜儀檢定規程”及《中國藥典》2005年版二部附錄VH制定。
1.3. 器操作及環境：應符合本儀器操作及維護保養規程。
2. 檢定項目和技術要求
2.1. 泵流量設定值誤差：Ss應≤±2%；重復性誤差：SR應≤±2%
2.2. 柱溫箱溫度設定值誤差ΔTs：應不超過±2.0℃；柱溫箱溫度穩定性：應不超過1.0℃。
2.3. 基線漂移：應≤5×10-6RIU/h；基線噪聲：應≤5×10-7 RIU。
2.4. 最小檢測濃度：應不超過5×10-6g/ml丙三醇/水溶液。
2.5. 定性測量重復性誤差(6次定量環進樣)應RSD≤1.5%。
2.6. 定量測量重復性誤差(6次定量環進樣)應RSD≤1.5%。
3. 檢定方法
3.1. 泵流量設定值誤差Ss，流量穩定性誤差SR的檢定
3.1.1. 儀器與用具
     分析天平   萬分之一
     秒表       精度1/100秒
     容量瓶     50ml
3.1.2. 操作程序
3.1.2.1. 將泵、進樣器、色譜柱和檢測器連接好，以甲醇為流動相。
3.1.2.2. 按表1設定流量，待流速穩定后，在流動相排出口用事先精密稱定過重量的容量瓶收集流動相，同時用秒表記錄，準確收集10～25分鐘，再精密稱定其重量。收集時間
符合表1規定，每個設定值重復測定3次。
3.1.3. 結果計算
按下列公式計算SS和SR：
Fm=（W2-W1）/（P.t）
SS=（Fm-FS）/FS×100%
SR=(Fmax-Fmin)/F×100%
W2為容量瓶+流動相的重量(g)
W1為容量瓶的重量
P為實驗條件下的流動相密度(g/cm3)
t為收集流動相的時間(min)
Fm為流量實測值(ml/min)
FS為流量設定值
Fmin為同一組測量中流量最小值
Fmax為同一組測量中流量最大值
F為同一組測量中流量的算術平均值
3.1.4. 結果判斷：SS和SR值應符合下表規定
流量設定值(ml/min)        0.5        1.0        1.5
測量次數        3        3        3
收集流動相時間(min)        25        15        10
允許誤差        SS        3%        2%        2%
        SR        3%        2%        2%
3.1.5. 注意事項：收集時間應將“秒”換算為“分”代入公式計算。
3.2. 柱溫箱溫度設定值誤差ΔTs、柱溫箱溫度穩定性Tc的檢定
3.2.1. 操作程序：將溫度設為40℃，將一經過校正的溫度計放入柱溫箱內，每隔10min讀取溫度計顯示溫度與柱溫箱顯示溫度一次，共讀取7次，求出平均值。
3.2.2. 結果計算：
ΔTs=平均值與設定值之差
Tc=7次讀數中最大值與最小值之差為控溫穩定性。
3.2.3. 結果判斷：柱溫箱溫度設定值誤差ΔTs應不超過±2.0℃；柱溫箱溫度穩定性應不超過1.0℃。
3.3. 基線漂移和基線噪聲的檢定
3.3.1. 色譜條件
色譜柱：C18
流動相：水
流速：1ml/min
數據處理：龍智達GPC色譜工作站
3.3.2. 操作步驟
將儀器各部份聯接好（檢測器接10mv輸出口），接通電源，以水為流動相，流速為1ml/min，量程范圍選擇0.01×10-6RIU，工作站放大倍數為5，啟動泵，待基線穩定后記錄基線30min和60min，根據檢測器衰減的倍數和測得的基線峰-峰高對應的記錄儀標度，按下式計算基線噪聲和基線漂移，用檢測器自身的物理量（RIU）表示。
3.3.3. 計算公式：
             A×0.01×10-6
基線噪聲=-----------------------
              10×5

B×0.01×10-6
基線漂移=-----------------------
             10×5
式中：
10—檢測器輸出電壓為10mv；
5—工作站放大倍數；
0.01×10-6—為設置量程，RIU；
A—所記錄基線30min內，基線最大峰-峰高對應的值，mv；
B--所記錄基線60min內，基線偏離原點的值，mv/h。
3.3.4. 結果判斷：
基線漂移應≤5×10-6RIU/h；
基線噪聲應≤5×10-7 RIU。
3.4. 最低檢測濃度的檢定
3.4.1. 對照品溶液的配制：配制含丙三醇5×10-6g/ml的水溶液。
3.4.2. 色譜條件：
色譜柱：C18        流動相：水       流速：1ml/min     進樣量：20ul（定量環）
數據處理：龍智達GPC色譜工作站
3.4.3. 操作步驟：將儀器各部份聯接好（檢測器接10mv輸出口），接通電源，以水為流動相，流速為1ml/min，量程范圍選擇0.01×10-6RIU，工作站放大倍數為5，啟動泵，待基線穩定后，將上述
配制好的對照品溶液進樣，記錄色譜圖。
3.4.4. 按下式計算最小檢測濃度：
              Cl=2?Nd?C/H
式中：
Cl：最小檢測濃度（g/ml）；
Nd：基線噪聲峰-峰高，mv；
C：對照品溶液濃度（g/ml）；
H：標準溶液的色譜峰高，mv。
3.4.5. 結果判斷：最低檢測濃度應不超過5×10-6g/ml（丙三醇/水溶液）。
3.5. 定性、定量重復性試驗
3.5.1. 色譜條件
色譜柱：C18
流動相：水
流速：1ml/min
進樣量：10ul（定量環）
數據處理：龍智達GPC色譜工作站
3.5.2. 操作程序
將儀器各部份聯接好（檢測器接10mv輸出口），接通電源，以水為流動相，流速為1ml/min，量程范圍選擇1×10-6RIU，工作站放大倍數為5，啟動泵，待基線穩定后，用進樣閥的定量環注入10ul1×10-3g/ml的丙三醇水溶液，連續進樣6次，記錄丙三醇的峰保留時間和峰面積。
3.5.3. 結果計算：

式中：
RSD%--定性（定量）測量重復性相對標準偏差；
Xi--第i次測得的保留時間或峰面積；
--6次測量結果的算術平均值；
i--測量序號。
3.5.4. 結果判斷
定性測量重復性誤差：6次峰保留時間相對標準偏差(RSD)應≤1.5%。
定量測量重復性誤差：6次峰面積相對標準偏差(RSD)應R≤1.5%。
4. 檢定周期
4.1. 法定檢定周期為1年。
4.2. 儀器維修或發現異常時應全面檢定一次。