HPLC故障及排除方法

HPLC故障及排除方法
藥物分析輔導(dǎo)：HPLC故障及排除方法
　　(一)保留時(shí)間變化
　　1.柱溫變化：柱恒溫；
　　2.等度與梯度間未能充分平衡：至少用10倍柱體積的流動(dòng)相平衡柱
　　3.緩沖液容量不夠：用>25mmol/L的緩沖液
　　4.柱污染：每天沖洗柱
　　5.柱內(nèi)條件變化：穩(wěn)定進(jìn)樣條件,調(diào)節(jié)流動(dòng)相
　　6.柱快達(dá)到壽命：采用保護(hù)柱
　　(二)保留時(shí)間縮短
　　1.流速增加：檢查泵,重新設(shè)定流速
　　2.樣品超載：降低樣品量
　　3.鍵合相流失：流動(dòng)相PH值保持在3"7.5檢查柱的方向
　　4.流動(dòng)相組成變化：防止流動(dòng)相蒸發(fā)或沉淀
　　5.溫度增加：柱恒溫
　　(三)保留時(shí)間延長(zhǎng)
　　1.流速下降：管路泄漏,更換泵密封圈,排除泵內(nèi)氣泡
　　2.硅膠柱上活性點(diǎn)變化：用流動(dòng)相改性劑,如加三乙胺,或采用堿至鈍化柱
　　3.鍵合相流失：同前(二)3
　　4.流動(dòng)相組成變化：同前(二)4
　　5.溫度降低：同前(二)5
　　(四)出現(xiàn)肩峰或分叉
　　1.樣品體積過(guò)大：用流動(dòng)相配樣,總的樣品體積小于第一峰的15%
　　2.樣品溶劑過(guò)強(qiáng)：采用較弱的樣品溶劑
　　3.柱塌陷或形成短路通道：更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件
　　4.柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效：更換燒結(jié)不銹鋼,加在線過(guò)濾器,過(guò)濾樣品
　　5.進(jìn)樣器損壞：更換進(jìn)樣器轉(zhuǎn)子
　　(五)鬼峰
　　1.進(jìn)樣閥殘余峰：每次用后用強(qiáng)溶劑清洗閥,改進(jìn)閥和樣品的清洗
　　2.樣品中未知物：處理樣品
　　3.柱未平衡：重新平衡柱,用流動(dòng)相作樣品溶劑(尤其是離子對(duì)色譜)
　　4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽譜)：每天新配,用抗氧化劑
　　5.水污染(反相)：通過(guò)變化平衡時(shí)間檢查水質(zhì)量，用HPLC級(jí)的水
　　(六)基線噪聲
　　1.氣泡(尖銳峰)：流動(dòng)相脫氣,加柱后背壓
　　2.污染(隨機(jī)噪聲)：清洗柱,凈化樣品,用HPLC級(jí)試劑
　　3.檢測(cè)器燈連續(xù)噪聲：更換氘燈
　　4.電干擾(偶然噪聲)：采用穩(wěn)壓電源,檢查干擾的來(lái)源(如水浴等)
　　5.檢測(cè)器中有氣泡：流動(dòng)相脫氣,加柱后背壓
　　(七)峰拖尾
　　1.柱超載：降低樣品量,增加柱直徑采用較高容量的固定相
　　2.峰干擾：清潔樣品,調(diào)整流動(dòng)相
　　3.硅羥基作用：加三乙胺,用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動(dòng)相PH值,鈍化樣品
　　4.同前(四)4：同前(四)4
　　5.同前(四)3：同前(四)3
　　6.死體積或柱外體積過(guò)大：連接點(diǎn)降至最低,對(duì)所有連接點(diǎn)作合適調(diào)整,盡可能采用細(xì)內(nèi)徑的連接管
　　7.柱效下降：用較低腐蝕條件,更換柱,采用保護(hù)柱
　　(八)峰展寬
　　1.進(jìn)樣體積過(guò)大：同(四)1
　　2.在進(jìn)樣閥中造成峰擴(kuò)展：進(jìn)樣前后排出氣泡以降低擴(kuò)散
　　3.數(shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速率太慢：設(shè)定速率應(yīng)是每峰大于10點(diǎn)
　　4.檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)過(guò)大：設(shè)定時(shí)間常數(shù)為感興趣第一峰半寬的10%
　　5.流動(dòng)相粘度過(guò)高：增加柱溫,采用低粘度流動(dòng)相
　　6.檢測(cè)池體積過(guò)大：用小體積池,卸下熱交換器
　　7.保留時(shí)間過(guò)長(zhǎng)：等度洗脫時(shí)增加溶劑含量也可用梯度洗脫
　　8.柱外體積過(guò)大：將連接管徑和連接管長(zhǎng)度降至最小
　　9.樣品過(guò)載：進(jìn)小濃度小體積樣品