翻譯了一篇很久以前下載的東西,和大家分享一下!在反相高效液相色譜分析中,選擇正確的緩沖液PH值,對(duì)可離解的化合物分析的重現(xiàn)性十分重要,不恰當(dāng)?shù)?/font>PH值可能導(dǎo)致不對(duì)稱峰,寬峰,分裂峰或肩峰,而尖銳的,對(duì)稱的峰是定量分析中獲得低的檢測(cè)限以,兩次分析之間較低的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)和保留時(shí)間的高重現(xiàn)性的前提。我們將討論在使用緩沖液時(shí)如何選擇緩沖液的PH值,以及如何選擇正確的緩沖體系。什么時(shí)候需要緩沖溶液?在反相液相色譜分析中,流動(dòng)相的PH值一般在2.5-7之間,當(dāng)被分析物在反相條件下可離解,或樣品的PH值在2.5-7之外時(shí),就需要緩沖液。在反相條件下可離解的化合物一般都有氨基和羧基,他們的Pka在1-11之間,選擇正確的緩沖液PH值可保證可離解的官能團(tuán)以一種形式存在,離子形式或中性化合物的形式。如果樣品的PH值對(duì)柱子有傷害,則緩沖溶液可使其變溫和從而減小其危害。如何選擇緩沖液PH值在選擇緩沖液PH值之前,應(yīng)先了解被分析物的Pka,高于或低于Pka兩個(gè)PH值單位的,有助于獲得好的、尖銳的峰,從HH公式:PH=Pka+log([A-]/[A])得知,溶液PH值高于或低于Pka兩個(gè)單位,化合物中99%以一種形式存在,而一種形式存在的化合物才能獲得好的尖銳的峰。讓我們通過一個(gè)例子來看如何選擇PH值例如苯甲酸圖(一)圖(一)顯示的是它的離子形式和中性化合物的轉(zhuǎn)變,苯甲酸的Pka等于4.2,理論上由HH公示得知,當(dāng)溶液PH值等于2.2時(shí),99%的苯甲酸以中性化合物存在,PH值等于6.2時(shí)99%的苯甲酸以離子形式存在,所以當(dāng)緩沖液PH值等于2.2時(shí),中性化合物以羧酸形式保留于反相柱,表1列出了一般緩沖液和他們的緩沖范圍。從表1知磷酸鹽和檸檬酸鹽緩沖液能用于PH值等于2.2。表1
Phosphate
Pka12.11.1-3.1
Pka27.26.2-8.2
Pka312.311.3-13.3
Citrate
Pka13.12.1-4.1
Pka24.73.7-5.7
Pka35.44.4-6.4
Formate3.82.8-4.8
Acetate4.83.8-5.8
Tris(hydroxymethyl)aminomethane8.37.3-9.3
ammonia9.28.2-10.2
borate9.28.2-10.2
diethylamine10.59.5-11.5
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