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[色譜/質(zhì)譜] 反相高效液相色譜中緩沖體系PH值的選擇

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sinowj 發(fā)表于 2007-3-5 14:52:41 | 只看該作者 回帖獎(jiǎng)勵(lì) |倒序?yàn)g覽 |閱讀模式
翻譯了一篇很久以前下載的東西,和大家分享一下!在反相高效液相色譜分析中,選擇正確的緩沖液PH值,對(duì)可離解的化合物分析的重現(xiàn)性十分重要,不恰當(dāng)?shù)?/font>PH值可能導(dǎo)致不對(duì)稱峰,寬峰,分裂峰或肩峰,而尖銳的,對(duì)稱的峰是定量分析中獲得低的檢測(cè)限以,兩次分析之間較低的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)和保留時(shí)間的高重現(xiàn)性的前提。我們將討論在使用緩沖液時(shí)如何選擇緩沖液的PH值,以及如何選擇正確的緩沖體系。什么時(shí)候需要緩沖溶液?在反相液相色譜分析中,流動(dòng)相的PH值一般在2.57之間,當(dāng)被分析物在反相條件下可離解,或樣品的PH值在2.57之外時(shí),就需要緩沖液。在反相條件下可離解的化合物一般都有氨基和羧基,他們的Pka111之間,選擇正確的緩沖液PH值可保證可離解的官能團(tuán)以一種形式存在,離子形式或中性化合物的形式。如果樣品的PH值對(duì)柱子有傷害,則緩沖溶液可使其變溫和從而減小其危害。如何選擇緩沖液PH在選擇緩沖液PH值之前,應(yīng)先了解被分析物的Pka,高于或低于Pka兩個(gè)PH值單位的,有助于獲得好的、尖銳的峰,從HH公式:PHPkalog[A-]/[A])得知,溶液PH值高于或低于Pka兩個(gè)單位,化合物中99%以一種形式存在,而一種形式存在的化合物才能獲得好的尖銳的峰。讓我們通過一個(gè)例子來看如何選擇PH例如苯甲酸圖(一)圖(一)顯示的是它的離子形式和中性化合物的轉(zhuǎn)變,苯甲酸的Pka等于4.2,理論上由HH公示得知,當(dāng)溶液PH值等于2.2時(shí),99%的苯甲酸以中性化合物存在,PH值等于6.2時(shí)99%的苯甲酸以離子形式存在,所以當(dāng)緩沖液PH值等于2.2時(shí),中性化合物以羧酸形式保留于反相柱,表1列出了一般緩沖液和他們的緩沖范圍。從表1知磷酸鹽和檸檬酸鹽緩沖液能用于PH值等于2.21
Phosphate  
Pka12.11.1
3.1
Pka27.26.2
8.2
Pka312.311.3
13.3
Citrate  
Pka13.12.1
4.1
Pka24.73.7
5.7
Pka35.44.4
6.4
Formate3.82.8
4.8
Acetate4.83.8
5.8
Tris
hydroxymethylaminomethane8.37.3-9.3
ammonia9.28.2-10.2
borate9.28.2-10.2
diethylamine10.59.5-11.5

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 樓主| sinowj 發(fā)表于 2007-3-5 14:54:06 | 只看該作者
當(dāng)化合物只有氨基時(shí),緩沖體系的選擇十分簡(jiǎn)單,大多數(shù)氨基化合物在PH值小于9時(shí)都被質(zhì)子化,所以所有PH值在7或更低的溶液均適合應(yīng)用,你也許會(huì)問水的PH值大約是7,為什么還用緩沖鹽,因?yàn)榫彌_鹽有助于增加方法的可靠性,以及色譜峰的尖銳性,PH值的降低有助于氨基化合物保留的減弱,減小化合物與硅膠表面硅羥基的作用,而使峰更尖銳,從表1 可值,任何緩沖液均可應(yīng)用于氨基化合物的分析,但我們認(rèn)為PH值等于3的磷酸鉀鹽最適合用于氨基化合物的分析。在上面兩個(gè)例子中,PH=3的磷酸鉀鹽都能獲得良好的應(yīng)用,在一般情況下,它是含羧基和氨基化合物分析中最好的緩沖液,并且我們認(rèn)為在氨基化合物分析中鉀鹽比鈉鹽更好。為離子對(duì)試劑選擇緩沖液為應(yīng)用離子對(duì)試劑的方法選擇緩沖液的過程是相似的,離子對(duì)試劑例如四丁基銨的鹽,十四烷基磺酸鈉等,在流動(dòng)相中可與化合物中可離解的官能團(tuán)配對(duì),在緩沖液中以離子形式存在的化合物就需要應(yīng)用離子對(duì)試劑。應(yīng)用緩沖液PH值來調(diào)節(jié)方法選擇性如前面提到的,氨基化合物的保留隨PH的減小而降低,這個(gè)特性可以用來調(diào)節(jié)方法的選擇性,如果兩個(gè)化合物共流出,一個(gè)含有氨基,適當(dāng)改變PH值就可以用來分離這一物質(zhì)對(duì)。由于可離解化合物的選擇性依靠PH值,所以變化PH值也可以用來鑒別未知化合物的官能團(tuán),如果PH值變小,出峰便快,則化合物中可能存在氨基,當(dāng)PH變大,化合物出峰很快,或流出在死時(shí)間處,化合物可能是一種羧酸,因?yàn)轸然x子化后流出大大快于比質(zhì)子化的中性化合物。總結(jié)正確選擇緩沖溶液在反相液相色譜方法中對(duì)于優(yōu)化尖峰,撿出限,以及獲得穩(wěn)定的保留時(shí)間十分重要,如果你知道化合物官能團(tuán)信息和化合物的Pka值這一過程將十分簡(jiǎn)單。

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