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標題: 薄層色譜的分離原理、條件選擇與操作方法 [打印本頁]

作者: csxfjsw123 時間: 2007-8-30 19:55
標題: 薄層色譜的分離原理、條件選擇與操作方法
一、薄層色譜概念
最常用的薄層色譜也屬于液-固吸附色譜。同柱色譜不同的是吸附劑被涂布在玻璃板上，形成薄薄的平面涂層。干燥后在涂層的一端點樣，豎直放入一個盛有少量展開劑的的有蓋容器中。展開劑接觸到吸附劑涂層，借毛細作用向上移動。與柱色譜過程相同，經過在吸附劑和展開劑之間的多次吸附-溶解作用，將混合物中各組分分離成孤立的樣點，實現混合物的分離。
薄層色譜原理圖
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除了固定相的形狀和展開劑的移動方向不同以外，薄層色譜和柱色譜在分離原理上基本相同。由于薄層色譜操作簡單，試樣和展開劑用量少，展開速度快，所以經常被用于探索柱色譜分離條件和監測柱色譜過程。

二、薄層色譜條件

⑴固定相選擇
柱色譜中提到的吸附劑都可以用作為薄層色譜的固定相，分離性能及使用選擇同柱色譜的選擇原則相同（各種吸附劑見柱色譜表1）。
一般用于薄層色譜時，要求吸附劑的粒度更小。商品吸附劑區分為色譜級（用于柱色譜）和薄層色譜級（用于薄層色譜）。
⑵展開劑選擇
薄層色譜展開劑的選擇和柱色譜一樣，主要根據樣品中各組分的極性、溶劑對于樣品中各組分溶解度等因素來考慮。展開劑的極性越大，對化合物的洗脫力也越大。（各種溶劑極性見柱色譜表2）。
選擇展開劑時，除參照表列溶劑極性來選擇外，更多地采用試驗的方法，在一塊薄層板上進行試驗：
①若所選展開劑使混合物中所有的組分點都移到了溶劑前沿，此溶劑的極性過強；
②若所選展開劑幾乎不能使混合物中的組分點移動，留在了原點上，此溶劑的極性過弱。
當一種溶劑不能很好地展開各組分時，常選擇用混合溶劑作為展開劑。先用一種極性較小的溶劑為基礎溶劑展開混合物，若展開不好，用極性較大的溶劑與前一溶劑混合，調整極性，再次試驗，直到選出合適的展開劑組合。合適的混合展開劑常需多次仔細選擇才能確定。
⑶相對移動值從點樣原點開始到展開后的溶劑前沿，是溶劑的移動距離，記為lo，混合物中各組分的移動距離分別記為l1，l2，l3 …（移動值示意圖）。
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移動值示意圖
在不同的展開條件下，各化合物的移動距離不會相同，而在同一條件下，相對于展開劑的移動距離，各化合物有可比較的展開數據，稱為相對移動值，或比移值：
Rf=li/lo
在相同條件下測得的比移值可以用于化合物的薄層色譜特征值進行比較對照。
⑷顯色
分離的化合物若有顏色，很容易識別出來各個樣點。但多數情況下化合物沒有顏色，要識別樣點，必須使樣點顯色。通用的顯色方法有碘蒸氣顯色和紫外線顯色。
①碘蒸氣顯色：將展開的薄層板揮發干展開劑后，放在盛有碘晶體的封閉容器中，升華產生的碘蒸氣能與有機物分子形成有色的締合物，完成顯色。
②紫外線顯色：用摻有熒光劑的固定相材料（如硅膠F，氧化鋁F等）制板，展開后在用紫外線照射展開的干燥薄層板，板上的有機物會吸收紫外線，在板上出現相應的色點，可以被觀察到。
有時對于特殊有機物使用專用的顯色劑顯色。此時常用盛有顯色劑溶液的噴霧器噴板顯色。

三、薄層色譜操作
⑴制板（以硅膠板為例）
選擇合適的玻璃板（經常使用顯微鏡上的載玻片），依次用水和乙醇洗凈，晾干。取適量薄層色譜用的硅膠，加適量蒸餾水調成糊。調制時慢慢攪拌，勿使產生氣泡。將糊倒在玻璃板上，搖動攤平，晾干。使用前放入烘箱內，在105-115oC左右烘干40-50分鐘。冷卻后使用。

⑵點樣
將試樣用最少量展開劑溶解，用毛細管蘸取試樣溶液，在薄層板上點樣。在樣點上輕輕畫出一條平行于玻璃板底邊的細線。薄層色譜板載樣量有限，勿使點樣量過多。
⑶展開
吹干樣點，豎直放入盛有展開劑的有蓋展開瓶中。展開劑要接觸到吸附劑下沿，但切勿接觸到樣點。蓋上蓋子，展開。待展開劑上行到一定高度（由試驗確定適當的展開高度），取出薄層板，再畫出展開劑的前沿線。
⑷顯色，計算Rf值
揮發干展開劑，選擇合適的顯色方法顯色。量出展開劑和各組分的移動距離，計算各組分的相對移動值。

四、薄層色譜應用

⑴可用于判斷兩個化合物是否相同（同一展開條件下是否有相同的移動值）；
⑵可用于確定混合物中含有的組分數；
⑶可用于為柱色譜選擇合適的展開劑，監視柱色譜分離狀況和效果；
⑷可用于檢測反應過程。

作者: batchenmin 時間: 2020-3-18 22:06
謝謝，大學學的知識，都忘了差不多了

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